Микробиология. Начало - Серафима Гурьева

Скачать книгу

корректировка рH среды при «+» растворов кислот и щелочей.

      3) Осветление с помощью яичного белка для сред, которые при варке мутнеют или темнеют.

      4) Фильтрация жидких и расплавленных сред через ватно-марлевый фильтр или путём отстаивания.

      5) Розлив сред по пробиркам, флаконам, колбам и т.п.

      6) Стерилизация зависит от состава среды и проводится в автоклавах, на водных банях или в свертывателе Коха (это металлический цилиндр, обшитый снаружи материалом (линолеум, асбест), плохо проводящим тепло. На дно наливают воду, а стерилизующий материал помещают сверху на подставку. Аппарат закрывают конической крышкой, в которой имеются отверстия для термометра и выхода пара. Внизу расположен кран для спуска воды. Стерилизацию проводят текучим паром при 100 °С в течение 30-60 мин. При таком режиме погибают вегетативные клетки спорообразующих и неспорообразующих форм микробов. В аппарате Коха стерилизуют те материалы, которые не выдерживают температуру выше 100 °С (желатин, молоко, углеводные среды и др.).

      Белковые среды и сыворотку крови, не переносящие температуру 100 °С, стерилизуют дробно при 56-58 °С в водяной бане).

      7) Контроль проводится с целью подтверждения стерильности и оптимальности рH.

      Алгоритм приготовления простых питательных сред:

      1) Мясопептонный бульон (МПБ):

      А) К мясной воде «+» 1% пептон, 0.5 частей NaCl.

      Б) Кипятят на слабом огне 10-15 минут до растворения веществ.

      В) Оптимизируют рH, снова кипятят 30-40 минут, до выпадения осадка.

      Г) Фильтруют, доливают до первоначально объема водой.

      Д) Стерилизуют 20 минут при 120°С.

      2) Мясопептонный агар (МПА):

      А) К МПБ до или после стерилизации»+» 2-3% измельченного агар-агара.

      Б) Кипятят, помешивая на слабом огне до полного расплавления агара. Можно варить в аппарате Коха или в автоклаве.

      В) При необходимости готовую среду осветляют (яичный желток).

      Г) Фильтруют, стерилизуют 20 минут при 120°С.

      3) Желатиновый столбик – простая среда, в пробирке нужна для определения протеолитических свойств бактерий (расщепление белка). Разжижение желатина – протеолитическая активности.

      4) Хромотогеные среды (ХС)– питательные среды, позволяющие по окраске колонии делать предварительные заключения о виде выделенного м.о.

      Принцип действия ХС– реактивы в составе среды, взаимодействуют с ферментами м.о. специфичными только для этого вида с образованием окрашенных веществ.

      Алгоритмы приготовления сложных питательных сред:

      1) Среда с углеводами:

      А) Сахарный бульон (СБ)– сложная жидкая питательная среда:

      1) К МПБ нейтральной реакции «+» 0.25-2% глюкозы (растворяют в небольшом количестве дистиллированной воде).

      2)Стерилизуют три дня подряд по 30 мин или однократно в автоклаве при 115°С 30 мин.

      Б) Сахарный агар (СА) – сложная плотная питательная среда:

      1) КМПА «+» 0.5-2% глюкозы (растворяют в небольшом количестве дистиллированной воде).

      2)

Скачать книгу