Медицинская паразитология с энтомологией - В. П. Андреев

Скачать книгу

точнее, производственный сухой комплемент, который при правильном хранении не теряет своей активности 1–2 года.

      Учет реакции производят через 1 ч после инкубации пробирок в термостате при температуре 37 °C.

      Реакцию гемолиза используют для определения количества комплемента в сыворотке крови людей, но чаще – как индикатор в реакции связывания комплемента.

      Реакция связывания комплемента

      Реакция связывания комплемента (РСК). Сложная двухэтапная реакция, в которой используются пять ингредиентов, составляющих две системы: антиген, антитело и комплемент (первая система); эритроциты барана, сенсибилизированные (обработанные) гемолитической сывороткой, содержащие специфические к ним антитела (вторая, или гемолитическая индикаторная система).

      Взаимодействие антитела с антигеном на первом этапе реакции приводит к образованию иммунного комплекса, что сопровождается активацией (адсорбцией) на нем комплемента, но визуально обнаружить это невозможно. Ввиду чего Дж. Борде и О. Жангу предложили на втором этапе постановки реакции в качестве индикатора фиксации комплемента на комплексе антиген – антитело использовать гемсистему, которая, являясь иммунным комплексом, тоже способна связывать его.

      В конечном итоге возможны два результата реакции. Если антитело и антиген соответствуют друг другу, а комплемент связывается образовавшимся комплексом, гемолиза эритроцитов гемсистемы не произойдет. При несоответствии антитела антигену комплемент, оставаясь свободным, присоединится к гемсистеме и вызовет гемолиз (рис. 7).

      Как и другие серологические реакции, РСК может быть использована для выявления специфических антител по известному антигену или для определения антигена по известным антителам.

      Накануне постановки РСК исследуемая сыворотка прогревается на водяной бане при температуре 56 °C в течение 30 мин для инактивации в ней собственного комплемента, а затем разводится, начиная с 1:5.

      Рис. 7. Реакция связывания комплемента: I – положительная; II, III – отрицательные; Ат – антитело; Аг – антиген; К – комплемент; Эр – эритроциты барана

      Антигеном для РСК могут быть культуры убитых бактерий, их лизаты, экстракты из патологически измененных и нормальных органов, тканевые липиды, вирусы и вируссодержащие материалы. Сухой комплемент или свежая сыворотка морской свинки перед титрованием разводится 1:10. Гемсистема, или смесь равных объемов гемолитической сыворотки в тройном титре и 3 %-ной взвеси бараньих эритроцитов по осадку, для сенсибилизации эритроцитов выдерживается в термостате при температуре 37 °C в течение 30 мин.

      Перед постановкой РСК комплемент и антиген титруются. Необходимость в титровании комплемента диктуется тем, что его содержание в крови морских свинок непостоянно. Для этого основной раствор комплемента (1:10) разливают в ряд пробирок от 0,05 до 0,5 мл и в каждую из них прибавляют 0,85 %-ный раствор натрия хлорида, доводя объем до 1,5 мл. Пробирки ставят в термостат при температуре 37 °C на 45 мин, после чего

Скачать книгу